A comprehensive review on the documented characteristics of four Reticulitermes termites (Rhinotermitidae, Blattodea) of China / Uma revisão abrangente sobre as características documentadas de quatro cupins Reticulitermes da China

Termites are known as social insects worldwide. Presently in China 473 species, 44 genera and 4 families of termites have been reported. Of them, 111 Reticulitermes species are widely spread in different zones of China. The dispersion flight season of these Chinese Reticulitermes species are usually started from February to June, but in some regions different species are distributed, sharing their boundaries and having overlapping flight seasons. These reasons become important sources of hybridization between two different heterospecific populations of termites. It was confirmed that the fertilized eggs and unfertilized eggs of some Reticulitermes termites have the capacity of cleavage. While the unfertilized eggs of R. aculabialis, R. chinensis and R. labralis cleaved normally and the only R. aculabialis unfertilized eggs develop in embryos. While, the R. flaviceps and R. chinensis were observed with their abnormal embryonic development, and not hatching of eggs parthenogenetically. They were reported more threatening to Chinese resources as they propagate with parthenogenesis, hybridization and sexual reproduction. Eggshell and macrophiles of eggs play important roles in species identification and control. Although, they are severe pests and cause a wide range of damages to wooden structures and products in homes, buildings, building materials, trees, crops, and forests in China's Mainland.

Os cupins são conhecidos como insetos sociais em todo o mundo. Atualmente na China foram relatadas 473 espécies, 44 gêneros e 4 famílias de cupins. Destas, 111 espécies de Reticulitermes estão amplamente distribuídas em diferentes zonas da China. A temporada de voo de dispersão dessas espécies chinesas de Reticulitermes geralmente começa de fevereiro a junho, mas em algumas regiões diferentes espécies são distribuídas, compartilhando seus limites e tendo temporadas de voo sobrepostas. Essas razões tornam-se importantes fontes de hibridização entre duas populações heteroespecíficas de cupins. Foi confirmado que os ovos fertilizados e não fertilizados de alguns cupins Reticulitermes possuem capacidade de clivagem. Já os ovos não fertilizados de R. aculabialis, R. chinensis e R. labralis clivaram normalmente, e os únicos ovos não fertilizados de R. aculabialis se desenvolvem em embriões. R. flaviceps e R. chinensis foram observados com desenvolvimento embrionário anormal, e não eclosão de ovos por partenogênese. Eles foram relatados como mais ameaçadores para os recursos chineses à medida que se propagam com partenogênese, hibridização e reprodução sexual. Casca de ovo e macrófilos de ovos desempenham papéis importantes na identificação e controle de espécies, embora sejam pragas graves e causem uma ampla gama de danos a estruturas e produtos de madeira em residências, edifícios, materiais de construção, árvores, plantações e florestas na China continental.

Fluorescence in situ hybridization (FISH) as an irreplaceable diagnostic tool for Williams-Beuren syndrome in developing countries: a literature review / Hibridização in situ fluorescente (FISH) como ferramenta diagnóstica insubstituível para a síndrome de Williams-Beuren em países em desenvolvimento: uma revisão de literatura

ABSTRACT Objective: The aim of this study was to sum up and characterize all Williams-Beuren syndrome cases diagnosed by fluorescence in situ hybridization (FISH) since its implementation, as well as to discuss FISH as a cost-effective methodology in developing countries. Data source: From January 1986 to January 2022, articles were selected using the databases in PubMed (Medline) and SciELO. The following terms were used: Williams syndrome and In Situ Hybridization, Fluorescence. Inclusion criteria included Williams-Beuren syndrome cases diagnosed by FISH with a stratified phenotype of each patient. Only studies written in English, Spanish, and Portuguese were included. Studies with overlapping syndromes or genetic conditions were excluded. Data synthesis After screening, 64 articles were included. A total of 205 individuals with Williams-Beuren syndrome diagnosed by FISH were included and further analyzed. Cardiovascular malformations were the most frequent finding (85.4%). Supravalvular aortic stenosis (62.4%) and pulmonary stenosis (30.7%) were the main cardiac alterations described. Conclusions: Our literature review reinforces that cardiac features may be the key to early diagnosis in Williams-Beuren syndrome patients. In addition, FISH may be the best diagnostic tool for developing nations that have limited access to new technologic resources.

RESUMO Objetivo: Caracterizar todos os casos de síndrome de Williams-Beuren (SWB) diagnosticados por hibridização in situ fluorescente (FISH) desde sua implementação, assim como discutir a relação custo-benefício da metodologia de FISH em países em desenvolvimento. Fontes de dados: Entre janeiro de 1986 e janeiro de 2022 foi realizada uma busca nas bases de dados PubMed (Medical Literature Analysis and Retrieval System Online — Medline) e Scientific Electronic Library Online (SciELO) usando os seguintes termos: síndrome de Williams e hibridização in situ fluorescente. O critério de inclusão utilizado foi conter a descrição detalhada de caso(s) de SWB por FISH. Apenas estudos escritos em inglês, espanhol e português foram incluídos. Trabalhos que apresentavam sobreposição de síndromes/condições genéticas foram excluídos. Síntese dos dados: Após os processos de inclusão, 64 artigos e 205 indivíduos com SWB diagnosticados por meio do método de FISH foram incluídos. O achado mais frequente entre os indivíduos foi a presença de algum tipo de malformação cardíaca (85,4%). A estenose aórtica supravalvar (62,4%) e a estenose pulmonar (30,7%) foram as alterações cardíacas mais descritas. A maioria dos estudos era proveniente dos continentes Europa, Ásia e América do Norte. Conclusões: A presente revisão de literatura reitera que as malformações cardíacas podem ser a chave para o diagnóstico precoce em pacientes com SWB. Ainda, a técnica de FISH parece ser a melhor ferramenta de diagnóstico para os países em desenvolvimento, cujo acesso às novas tecnologias ainda é escasso.

Impacto da irradiação com laser ND: YAG sobre primer de adesivo convencional na adesão à dentina / Impact of Nd: YAG laser irradiation on primer of conventional adhesive in adhesion to dentin

A irradiação da dentina com o laser Nd:YAG mostra-se promissora para a qualidade da adesão, desde que aplicada sob parâmetros específicos e em etapas definidas. O objetivo deste estudo é avaliar de forma comparativa, o impacto da irradiação com laser de Nd:YAG sobre a formação e estabilidade da camada híbrida em dentina humana, pré-tratada com ácido e primer de sistema adesivo convencional, "in vitro". Setenta molares hígidos tiveram suas raízes e porções coronárias seccionadas horizontalmente, até completa exposição de dentina oclusal. As amostras foram divididas em: G1 (controle n=20); G2 (experimental n=20), sendo 10 dentes de cada grupo destinados ao microcisalhamento (MC) e 10 dentes à microscopia eletrônica de varredura (MEV). Nos 30 dentes restantes analisou-se: textura por Tomografia Computadorizada de Feixe Cônico (AT=15); e Espectroscopia de Infravermelho por Transformada de Fourier (FTIR=15) em 3 momentos: dentina controle; após tratamento com ácido + primer; e posterior à irradiação a laser. Estatisticamente, optou-se por ANOVA 1 fator, Qui Quadrado de Pearson, teste T e múltiplas comparações de Tukey com significância de 5%. A FTIR evidenciou redução dos níveis de fosfato e carbonato nos momentos primer e após irradiação laser, porém não havendo desnaturação do colágeno exposto. A análise de textura evidenciou uma tendência à formação de um tecido mais padronizado após o uso do laser. O teste de MC evidenciou valores médios de 36,5 e 35,2MPa para G1 e G2 respectivamente (p>0,05) e portanto, de forma imediata, o laser não mostrou efeitos deletérios ao processo adesivo. Além disso, observou-se maior penetrabilidade do adesivo na avaliação em MEV após a aplicação do laser. Novas pesquisas com avaliação longitudinal mostram-se necessárias para verificar se o efeito do laser pode ter sido protetor da degradação hidrolítica, visto que há uma redução do conteúdo de água local durante a formação da camada híbrida (AU).

Irradiation of dentin with the Nd:YAG laser shows promise for the quality of adhesion, as long as it is applied under specific parameters and in defined steps. The objective of this study is to comparatively evaluate the impact of irradiation with Nd:YAG laser on the formation and stability of the hybrid layer in human dentin, pretreated with acid and primer of conventional adhesive system, "in vitro". Seventy healthy molars had their roots and coronal portions horizontally sectioned, until complete exposure of occlusal dentin. The samples were divided into: G1 (control n=20); G2 (experimental n=20), with 10 teeth from each group destined for microshearing (MC) and 10 teeth for scanning electron microscopy (SEM). In the 30 remaining teeth analyzed: texture by Cone Beam Computed Tomography (AT=15); and Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR=15) in 3 moments: dentin control; after treatment with acid + primer; and after laser irradiation. Statistically, we opted for 1-way ANOVA, Pearson's Chi Square, T test and Tukey's multiple comparisons with a significance of 5%. FTIR showed a reduction in phosphate and carbonate levels in the primer moments and after laser irradiation, but there was no denaturation of the exposed collagen. The texture analysis evidenced a trend towards the formation of a more expressive tissue after the use of the laser. The CM test showed mean values of 36.5 and 35.2MPa for G1 and G2 respectively (p>0.05) and therefore, immediately, the laser showed no deleterious effects on the adhesive process. In addition, greater penetrability of the adhesive was observed in the SEM evaluation after laser application. New studies with longitudinal evaluation are necessary to verify if the laser effect could have been protected from hydrolytic degradation, since there is a reduction in the local water content during the formation of the hybrid layer (AU).

Tracking the evolutionary pathways among Brazilian Lebiasina species (Teleostei: Lebiasinidae): a chromosomal and genomic comparative investigation

Despite several difficulties in chromosomal analyses of small-sized fishes, the cytogenetics of the Lebiasinidae was largely improved in the last years, showing differential patterns in the chromosomal evolution inside the family. In this context, it has been shown that genus Lebiasina preserves its karyotypic macrostructure, composed of 2n = 36 chromosomes, whereas the other genera generally present higher 2n. This study focused on the comparative cytogenetics of three Lebiasina species, one of them analyzed here for the first time, using conventional and molecular procedures. The results reinforced the differentiated evolutionary path of the genus Lebiasina while, at the same time, highlighted the genomic particularities that have accompanied the evolution of each species. In this sense, the repetitive components of the genome played a significant role in the differentiation of each species. It is also notable that L. minuta and L. melanoguttata, the two species that occur exclusively in the Brazilian territory, show greater chromosomal similarities to each other than to the trans-Andean sister species, L. bimaculata.(AU)

Apesar das dificuldades encontradas em se realizar análises cromossômicas em peixes de pequeno porte, os estudos citogenéticos em Lebiasinidae vêm crescendo nos últimos anos e demonstrando padrões diferenciados na evolução cromossômica entre os membros da família. Nesse contexto, o gênero Lebiasina tem mostrado preservar sua macroestrutura cariotípica, composta por 2n = 36 cromossomos, enquanto os demais gêneros geralmente apresentam 2n maiores. Este estudo tem como foco a citogenética comparativa de três espécies de Lebiasina, sendo uma delas analisada pela primeira vez aqui, através do emprego de técnicas convencionais e moleculares. Os resultados obtidos reforçam a trajetória evolutiva diferenciada do gênero Lebiasina, ao mesmo tempo em que evidenciam as particularidades genômicas que acompanham a evolução de cada uma das espécies. Neste contexto, os componentes repetitivos do genoma tiveram um papel importante na caracterização particular de cada uma das espécies. Também, é notável que L. minuta e L. melanoguttata, duas espécies que ocorrem exclusivamente no território brasileiro, apresentam maior proximidade citogenética entre elas do que com a espécie irmã transandina, L. bimaculata.(AU)

Understanding professional stratification and hybridisation in the medical profession: exploratory evidence from Brazilian federal university hospitals / Comprendiendo la estratificación e hibridación profesional en la profesión médica: evidencia exploratoria de los hospitales universitarios federales de Brasil / Compreendendo a estratificação profissional e hibridização na profissão médica: evidências exploratórias de hospitais universitários federais brasileiros

Abstract This paper explores drivers, implications, and trends of professional stratification and hybridisation in the medical profession employed in Brazilian substituir por: federal university hospitals (HUFs). Drawing on exploratory findings, we examine some repercussions of the migration of university hospitals to EBSERH, a public company established by the federal government to manage and organise HUFs integrated into the Unified Health System (SUS). Our research shows that transferring hospital administration to EBSERH has led to further internal stratification of the medical workforce. The shift from the logic of medical-academic professionalism to the new logic of business-like healthcare, with the adoption of distinct job contracts and more managerial logics of work and control, may well be changing subjective and formal links established between professionals, universities, and hospitals. We identify and discuss trends towards hybridisation and dehybridisation. These findings are relevant because this shift can have profound implications for the academic nature of HUFs and for the future of professionalism within these health and teaching organisations.

Resumen Este artículo explora impulsores, implicaciones y tendencias de la estratificación y la hibridación profesional en la profesión médica empleada en los hospitales universitarios federales brasileños (HUFs). A partir de hallazgos exploratorios, examinamos algunas de las repercusiones de la migración de los hospitales universitarios a la EBSERH, una empresa pública creada por el gobierno federal para administrar y organizar los HUFs integrados en el Sistema Único de Salud (SUS). Nuestra investigación muestra que la transferencia de la administración hospitalaria a la EBSERH ha llevado a una mayor estratificación interna de la fuerza laboral médica. El cambio de la lógica del profesionalismo médico-académico a una lógica empresarial en salud, con la adopción de diferentes regímenes de empleo y modos de trabajo y control más gerenciales, puede estar alterando los vínculos subjetivos y formales que se establecen entre los profesionales, las universidades y los hospitales involucrados. Se identifican y discuten tendencias hacia la hibridación y deshibridación. Estos hallazgos son relevantes porque tales cambios pueden tener profundas implicaciones para la naturaleza académica de los HUFs, así como para el futuro del profesionalismo dentro de estas organizaciones de salud y educación.

Resumo: Este artigo explora motivadores, implicações e tendências de estratificação e hibridização profissional na profissão médica atuante em hospitais universitários federais brasileiros (HUFs). Com base em achados exploratórios, examinamos algumas das repercussões da migração dos hospitais universitários para a EBSERH, uma empresa pública criada pelo governo federal para gerenciar e organizar os HUFs vinculados ao Sistema Único de Saúde (SUS). A pesquisa mostra que a transferência da administração hospitalar para a EBSERH tem acarretado maior estratificação interna da força de trabalho médica. A mudança da lógica de profissionalismo médico-acadêmico para uma nova lógica empresarial de saúde, com a adoção de distintos regimes empregatícios e formas de trabalho e controle mais gerenciais, podem estar alterando vínculos subjetivos e formais estabelecidos entre os profissionais, as universidades e os hospitais envolvidos. Tendências em direção à hibridização e desibridização foram identificadas e discutidas. Esses achados são relevantes tendo em vista que tais movimentos podem representar implicações profundas para a natureza acadêmica dos HUFs e para o futuro do profissionalismo nessas organizações de saúde e ensino.

5p13. 2 Chromosomal duplication syndrome: case report and literature review / Síndrome de duplicação cromossômica 5p13. 2: relato de caso e revisão da literatura

Chromosome 5p13 duplication syndrome represents a contiguous gene syndrome involving duplication of several genes on chromosome 5p13. Some clinical phenotypes are related to it, such as: obsessive-compulsive behavior, small palpebral fissures, intellectual disability, global development delay and ocular hypertelorism. The exact mechanism behind these changes has not well known and further studies are needed for this purpose. Since it is a rare and uncommon clinical situation, the case report contributes to the knowledge of the disease and early diagnosis. This condition mainly affects the cognitive neuromuscular system. We describe an 8-year-old Brazilian patient with the duplication of chromosome 5p13.2, karyotype, whose neurodevelopmental evaluation presented cognitive impairment, severe language delay and atypical physical examination, with ocular hypertelorism, right auricular tags, congenital heart defect and long fingers. The patient was diagnosed by comparative genomic hybridization (CGH)-array revealing a 204Kb of DNA duplication. The exact mechanism behind these structural disorders is still unclear and further studies are needed for this purpose. Nevertheless, the diagnostic suspicion of this genetic alteration that, in general, presents late diagnosis, should be considered to enable better clinical support to the patients and family genetic counseling.

A síndrome da duplicação do cromossomo 5p13 representa uma síndrome genética contígua envolvendo a duplicação de vários genes contidos nesta região. Alguns fenótipos clínicos estão relacionados com ela, tais como: comportamento obsessivo compulsivo, fissuras palpebrais pequenas, déficit intelectual, atraso no desenvolvimento global e hipertelorismo ocular. Por ser uma situação clínica rara, o relato do caso contribui para a disseminação do conhecimento acerca da condição, assim como para seu diagnóstico precoce. Descrevemos uma paciente brasileira de oito anos com a duplicação do cromossomo 5p13.2, que na avaliação do neurodesenvolvimento apresentou comprometimento cognitivo, grave atraso da linguagem e dismorfismos como hipertelorismo ocular, apêndice auricular direito, sopro cardíaco, relacionado a defeito do septo ventricular, e dedos alongados. A paciente foi diagnosticada por meio da pesquisa molecular (CGH)-array com ganho de 204Kb de DNA. O mecanismo exato por trás dessas alterações estruturais ainda não está claro e são necessários mais estudos para este fim. Não obstante, a suspeita diagnóstica dessa alteração genética que, em geral, apresenta diagnóstico tardio, deve ser aventada para viabilizar melhor suporte clínico aos pacientes e aconselhamento genético familiar.

Synthesis and antileishmanial activity of naphthoquinone-based hybrids / Síntesis y actividad antileishmania de híbridos naftoquinónicos / Síntese e atividade antileishmania de híbridos naftoquinónicos

SUMMARY Introduction: Leishmaniasis is a disease caused by protozoa of the genus Leishmania and is considered endemic in 98 countries. Treatment with pentavalent antimonials has a high toxicity, which motivates the search for effective and less toxic drugs. α- and β-lapachones have shown different biological activities, including antiprotozoa. In recent studies, the isonicotinoylhydrazone and phthalazinylhydrazone groups were considered innovative in the development of antileishmania drugs. Molecular hybridization is a strategy for the rational development of new prototypes, where the main compound is produced through the appropriate binding of pharmacophoric subunits. Aims: To synthesize four hybrids of α- and β-lapachones, together with the isonicotinoylhydrazone and phthalazinylhydrazone groups and to determine the antileishmania activity against the promastigotic forms of L. amazonensis, L. infantum and L. major. Results: β-lapachone derivatives were more active against all tested leishmania species. βACIL (IC50 0.044μM) and βHDZ (IC50 0.023μM) showed 15-fold higher activity than amphotericin B. The high selectivity index exhibited by the compounds indicates greater safety for vertebrate host cells. Conclusion: The results of this work show that the hybrids βACIL and (3HDZ are promising molecules for the development of new antileishmania drugs.

RESUMEN Introducción: Leishmaniasis es una enfermedad causada por protozoos del género Leishmania y se considera endémica en 98 países. El tratamiento con antimoniales pentavalentes tiene una alta toxicidad, lo que motiva la búsqueda de fármacos eficaces y menos tóxico. α- y β-lapachones han mostrado diferentes actividades biológicas, incluido los antiprotozoarios. En estudios recientes, los grupos isonicotinoilhidra-zona y ftalazinilhidrazona se consideraron innovadores en el desarrollo de fármacos antileishmania. La hibridación molecular es una estrategia para el desarrollo racional de nuevos prototipos, donde el compuesto principal se produce a través de la unión apropiada de subunidades farmacofóricas. Objetivos: Sintetizar cuatro híbridos de α- y β-lapachones, junto con los grupos isonicotinoilhidrazona y ftalazinilhidrazona y determinar la actividad antileishmania frente a las formas promastigotas de L. amazonensis, L. infantum y L. major. Resultados: Los derivados de β-lapachone fueron más activos contra todas las especies de leishmania probadas. La βACIL (CI50 0,044μM) y βHDZ (CI50 0,023μM) mostraron actividad 15 veces mayor que la anfotericina B. El alto índice de selectividad que presentan los compuestos indica una mayor seguridad para las células huésped del vertebrado. Conclusión: Los resultados de este trabajo demuestran que los híbridos (ACIL y (HDZ son moléculas prometodoras para el desarrollo de nuevos fármacos antileishmania.

RESUMO Introdução: A leishmaniose é uma doença causada por protozoários do género Leishmania e é considerada endémica em 98 países. O tratamento com antimoniais pentavalentes apresenta alta toxicidade, o que motiva a pesquisa por medicamentos eficazes e menos tóxicos. α- e β-lapachones tém mostrado diferentes atividades biológicas, incluindo antiprotozoários. Em estudos recentes, os grupos isonicotinoilhi-drazona e ftalazinilhidrazona foram considerados inovadores no desenvolvimento de drogas antileishmania. A hibridização molecular é uma estratégia para o desenvolvimento racional de novos protótipos, onde o composto principal é produzido através da ligação apropriada de subunidades farmacofóricas. Objetivos: Sintetizar quatro híbridos de α- e β-lapachones, juntamente com os grupos isonicotinoil-hidra-zona e ftalazinilhidrazona e determinar a atividade antileishmania contra as formas promastigóticas de L. amazonensis, L. infantum e L. major. Resultados: Os derivados de β-lapachona foram mais ativos contra todas as espécies de leishmania testadas. BACIL (IC50 0,044 μM) e βHDZ (IC50 0,023 μM) apresentaram atividade 15 vezes maior do que a anfotericina B. O alto índice de seletividade dos compostos indica maior segurança para células hospedeiras de vertebrados. Conclusaõ: Os resultados deste trabalho mostram que os híbridos βACIL e βHDZ são moléculas promissoras para o desenvolvimento de novos fármacos antileishmania.

The use of volatile compounds as an alternative method in pepper breeding (Capsicum baccatum var. pendulum) / O uso de compostos voláteis como método alternativo no melhoramento da pimenta (Capsicum baccatum var. pendulum)

ABSTRACT: The aim of this study is to determine some fruit characteristics of 19 different lines hybridized by previous regular studies. These lines were examined in order to determine the differences among volatile components and reveal the differences in comparison with the parents. Plant height (cm), fruit weight (g), fruit width (mm), fruit length (mm), fruit flesh thickness (mm), pungency, immature fruit color and mature fruit color were determined of parents and F4 lines. As a result, a wide range of variations were determined between lines and parents in terms of all parameters apart from pungency. Especially in terms of volatile components, it has been found that some active substances are found only in the father and white genotype (Fenchol, spathulenol and geranyl acetate), some of them only in the mother and orange genotype (α-terpineol, dihexyl azelate and 2-hexadecanol). It was concluded that volatile compounds of the species can be used as a marker for breeding studies.

RESUMO: O objetivo deste estudo é determinar algumas características dos frutos de 19 linhagens diferentes hibridizadas por estudos regulares anteriores. Essas linhas foram examinadas a fim de determinar as diferenças entre os componentes voláteis e revelar as diferenças em comparação com os pais. Altura da planta (cm), peso do fruto (g), largura do fruto (mm), comprimento do fruto (mm), espessura da polpa do fruto (mm), pungência, cor do fruto imaturo e cor do fruto maduro foram determinados dos pais e das linhas F4. Como resultado, uma ampla gama de variações foi determinada entre as linhas e os pais em termos de todos os parâmetros, exceto a pungência. Especialmente em termos de componentes voláteis, verificou-se que algumas substâncias ativas são encontradas apenas no genótipo pai e branco (Fenchol, espatulenol e acetato de geranila), algumas delas apenas no genótipo mãe e laranja (α-terpineol, azelato de dihexila e 2-hexadecanol). Concluiu-se que compostos voláteis da espécie podem ser usados como marcadores para estudos de melhoramento.

Parasitological assessment in hybrids Serrasalmidae fish farmed in Brazil / Avaliação parasitológica em híbridos de peixes Serrasalmidae cultivados no Brasil

Abstract This study evaluated the parasitic fauna of hybrids tambacu (Colossoma macropomum × Piaractus mesopotamicus) and patinga (P. mesopotamicus × Piaractus brachypomus) and their host-parasite-environment interaction during the warm and cold seasons in two fish farms located in the State of Mato Grosso do Sul, Brazil, South America. A total of 120 fish, being 60 fish for species (30 in the warm season and 30 in the cold season) were examined. Water quality was measured weekly to evaluate the interaction between environmental conditions and parasitism. Fifteen species of parasites were found: Ichthyophthirius multifiliis, Chilodonella hexasticha e Trichodina sp. (Protozoa), Henneguya piaractus, Myxobolus colossomatis and Myxobolus cuneus (Myxozoa); Anacanthorus penilabiatus, Mymarothecium boegeri, Mymarothecium viatorum, and Notozothecium janauachensis (Monogenoidea), Goezia spinulosa and Goezia sp. (Nematoda), Echinorhynchus jucundus (Acanthocephala), and Dolops carvalhoi, Lernaea cyprinacea (Crustacea). The ciliate protozoan I. multifiliis and monogenoids were the most prevalent parasites in the cold and warm seasons for both hybrids in the different culture systems intensive production and sportive fishing. It was observed that the serrasalmid hybrids are more susceptible to parasites and harbor high diversity of parasites in relation to the parental species C. macropomum, P. mesopotamicus and P. brachypomus, with a predominance of ectoparasites.

Resumo Este estudo avaliou a fauna parasitária de híbridos tambacu (Colossoma macropomum × Piaractus mesopotamicus) e patinga (P. mesopotamicus × Piaractus brachypomus) e a interação hospedeiro-parasito-ambiente durante as estações quente e fria em duas pisciculturas localizadas no estado de Mato Grosso do Sul, Brasil, América do Sul. Foram examinados um total de 120 peixes, sendo 60 peixes por espécie. A qualidade da água foi mensurada semanalmente para avaliar a interação entre condições ambientais e parasitismo. Foram encontradas quinze espécies de parasitos: Ichthyophthirius multifiliis, Chilodonella hexasticha e Trichodina sp. (Protozoa); Henneguya piaractus, Myxobolus colossomatis e Myxobolus cuneus (Myxozoa), Anacanthorus penilabiatus, Mymarothecium boegeri, Mymarothecium viatorum e Notozothecium janauachensis (Monogenoidea), Goezia spinulosa e Goezia sp. (Nematoda), Echinorhynchus jucundus (Acanthocephala), Dolops carvalhoi eLernaea cyprinacea (Crustacea). O protozoário ciliado I. multifiliis e helmintos monogenoides foram os parasitos mais prevalentes nas estações fria e quente para ambos os híbridos nos diferentes sistemas de cultivo, produção intensiva comercial e pesca esportiva. Observou-se que os híbridos de serrasalmídeos são mais suscetíveis aos parasitos e abrigam alta diversidade parasitária em relação às espécies parentais, C. macropomum, P. mesopotamicus e P. brachypomus em ambiente de cultivo com predominância de ectoparasitos.

Influência do selamento dentinário imediato com sistema adesivo universal na resistência de união / Influence of immediate dentin sealing on dentin bond strength with universal adhesive system

Resumo Introdução O selamento dentinário imediato consiste na aplicação imediata de um sistema adesivo sobre exposições dentinárias após o preparo dental e previamente aos procedimentos de moldagem. Objetivo O objetivo do estudo foi avaliar a influência do selamento dentinário imediato (SDI) na resistência adesiva do sistema adesivo universal (Single Bond Universal, 3M ESPE) em dentina, na forma de aplicação autocondicionante. Material e método 30 incisivos bovinos foram divididos em 3 grupos (n = 10): grupo S (Sem Selamento Dentinário Imediato), grupo SDI (Selamento Dentinário Imediato) e grupo SDIF (Selamento Dentinário Imediato + Resina Flow). A superfície vestibular foi desgastada com pontas diamantadas até a exposição superficial de dentina. A simulação da lama dentinária foi realizada com lixa d'água por 30s e a dentina tratada de acordo com o respectivo grupo. Para simulação da restauração provisória, foram cimentados blocos de resina bisacrílica com cimento de óxido de zinco. Após 7 dias, foi realizada a cimentação definitiva de blocos de resina com cimento resinoso dual (RelyX ARC, 3M ESPE). Os espécimes foram seccionados para obtenção de filetes de 1mm2 e submetidos ao teste de microtração, em uma máquina universal de ensaios (Instron). Os resultados foram tabulados e submetidos a Análise de Variância (ANOVA) e teste de Tukey a 5% de significância. Resultado Observaram-se maiores valores de resistência de união para o grupo SDIF (23,53 MPa), diferindo estatisticamente do Grupo S (17,65 MPa) (p=0,008). O grupo SDI apresentou valor médio de resistência de união (19,25 MPa), não diferindo estatisticamente dos grupos S (p=0,68) e SDIF (p=0,07). Conclusão Recomenda-se a técnica de selamento dentinário imediato seguido da uma camada de resina flow, em exposições dentinárias ocasionadas pelo preparo dental para restaurações indiretas.

Abstract Introduction Imediate dentin sealing (IDS) is a procedure where a dentin adhesive is applied on the exposed dentin surfaces after its preparation to indirect restorations and before impression procedures. Objective The objective of the study was to evaluate the effectiveness of the immediate dentin sealing technique (SDI) in adhesive resistance, using the Universal adhesive system (Single Bond Universal, 3M ESPE). Material and method 30 bovine incisors were selected and divided into 3 groups (n = 10): Groups S (Without Immediate Dentin Seal), SDI (Immediate Dentin Seal with Adhesive) and SDIF (Immediate Dentin Seal with Adhesive + Flow Resin). The vestibular surface was worn with diamond-tipped conical tips until superficial dentin exposure. The smear layer simulation was carried out with # 600 granulation sandpaper for 30s and the dentin was treated according to the respective group. To simulate the temporary restoration, blocks of bisacrylic resin were cemented with zinc oxide cement. After 7 days, the final cementation of resin blocks with dual resin cement (RelyX ARC, 3M ESPE) was carried out. The specimens were sectioned to obtain 1mm2 fillets and subjected to the microtensile test. Result The ANOVA test showed a statistical difference between the groups evaluated. Higher values of bond strength were observed for the SDIF group (23.53 MPa), differing statistically from Group S (17,65 MPa) (p = 0.008). The SDI group showed an average bond strength (19.25 MPa), which did not differ statistically from groups S (p = 0.68) and SDIF (p = 0.07). Conclusion Based on the results, it is recommended the immediate dental sealing technique with adhesive + flow resin in dental exposures caused in the dental preparation for indirect restorations.

Validation of chromogenic in situ hybridization reactions for DNA and RNA detection in formalin-fixed paraffin-embedded tissue / Validação das reações de hibridização in situ cromogênica para detecção de DNA e RNA em tecidos fixados em formalina e incluídos em parafina

ABSTRACT Introduction: Chromogenic in situ hybridization (CISH) is used alternatively to the traditional immunohistochemical methods for the diagnosis of infectious diseases in formalin-fixed paraffin-embedded samples, since it presents high sensitivity and specificity. This type of sample undergoes several chemical modifications during histological processing, and both poor and excessive fixation can impair sample quality, making it difficult to obtain good results. In CISH, it is common to use positive samples as quality control for the reactions; however, this practice does not provide any information regarding the preservation of the genetic material, nor does it avoid false-negative results. Objective: The objective of this study was to validate the deoxyribonucleic acid (DNA) (+) and (-), and ribonucleic acid (RNA) (+) and (-) control probes to be used as quality control for the samples, evaluating preservation of the genetic material. Materials and methods: Twelve histological sections were used (in quadruplicate, n = 48), prepared from a pool of tissues without microscopic changes related to infectious and/or inflammatory processes. The CISH protocol was conducted according to the manufacturer's instructions, standardized under the conditions of our laboratory, using commercial DNA and RNA probes chemically linked to digoxigenin. Results and conclusion: Our results were very satisfactory, showing high reproducibility, accuracy, sensitivity and analytical specificity, high predictive values for positive and negative assays and with zero ratio of false-positive and false-negative results, allowing the validation of this reaction.

RESUMEN Introducción: La hibridación in situ cromogénica (CISH) es una alternativa a los métodos tradicionales inmunohistoquímicos para el diagnóstico de enfermedades infecciosas en muestras fijadas en formoly embebidas enparafina, puesto que tiene alta sensibilidad y especificidad. Este tipo de muestra sufre diversas modificaciones químicas durante elprocesamiento histológico, y tanto la mala fijación cuanto la fijación excessiva pueden perjudicar la calidad de las muestras, impidiendo buenos resultados. En la CISH, es común el empleo de muestras positivas para control de calidad de reacciones; sin embargo, esta práctica no proporciona ninguna información acerca de la preservación del material genético. Objetivo: El propósito de este estudio ha sido realizar la validación de las sondas comerciales para ácido desoxirribonucleico (ADN) (+) y (-) y ácido ribonucleico (ARN) (+) y (-), para que sean utilizadas como control de calidad, evaluando la preservación del material genético en las muestras testadas. Material y métodos: Se incluyen en el estudio 12 cortes histológicos (en cuadruplicado, n = 48), confeccionados a partir de un pool de tejidos sin alteraciones microscópicas relacionadas con procesos infecciosos y/o inflamatorios. El protocolo de CISH se desarrolló de acuerdo a las instrucciones del fabricante y bajo las condiciones del nuestro laboratorio, haciendo uso de sondas comerciales de ADN y ARN quimicamente ligadas a digoxigenina. Resultados y conclusión: Nuestros resultados han sido muy satisfactorios, demostrando alta reproducibilidad, exactitud, sensibilidad, y especificidad analítica, así como altos valores predictivos para ensayos positivos y negativos, y con proporción nula de falsos negativos y falsos positivos, lo que ha permitido la validación de esa reacción.

RESUMO Introdução: A hibridização in situ cromogênica (CISH) é uma alternativa aos métodos tradicionais imuno-histoquímicospara diagnóstico de doenças infecciosas em amostras fixadas em formalina e incluídas em parafina, visto que apresenta grande sensibilidade e especificidade. Esse tipo de amostra sofre diversas modificações químicas durante o processamento histológico, e tanto a má fixação quanto a fixação em excesso podem prejudicar a qualidade das amostras, inviabilizando bons resultados. Na CISH, é comum a utilização de amostras positivas como controle de qualidade das reações; entretanto essa prática não fornece nenhuma informação a respeito da preservação do material genético, nem evita resultados falso-negativos nas amostras testadas. Objetivo: O objetivo deste estudo foi realizar a validação das sondas comerciais para ácido desoxirribonucleico (DNA) (+) e (-) e ácido ribonucleico (RNA) (+) e (-), para serem utilizadas como controle de qualidade, avaliando apreservação do material genético nas amostras testadas. Materiais e métodos: Foram utilizados 12 cortes histológicos (em quadruplicata, n = 48), confeccionados a partir de um pool de tecidos sem alterações microscópicas relacionadas com processos infecciosos e/ou inflamatórios. O protocolo de CISH foi conduzido de acordo com as instruções do fabricante e padronizado conforme as condições do nosso laboratório, utilizando sondas comerciais de DNA e RNA quimicamente ligadas à digoxigenina. Resultados e conclusão: Nossos resultados foram muito satisfatórios, demonstrando alta reprodutibilidade, acurácia, sensibilidade e especificidade analítica, bem como altos valores preditivos para ensaios positivos e negativos e com proporção nula de resultados falso-negativos e falso-positivos, o que possibilitou a validação dessa reação.

Chromosomal distribution of the retroelements Rex 1, Rex 3 and Rex 6 in species of the genus Harttia and Hypostomus (Siluriformes: Loricariidae)

The transposable elements (TE) have been widely applied as physical chromosome markers. However, in Loricariidae there are few physical mapping analyses of these elements. Considering the importance of transposable elements for chromosomal evolution and genome organization, this study conducted the physical chromosome mapping of retroelements (RTEs) Rex1, Rex3 and Rex6 in seven species of the genus Harttia and four species of the genus Hypostomus, aiming to better understand the organization and dynamics of genomes of Loricariidae species. The results showed an intense accumulation of RTEs Rex1, Rex3 and Rex6 and dispersed distribution in heterochromatic and euchromatic regions in the genomes of the species studied here. The presence of retroelements in some chromosomal regions suggests their participation in various chromosomal rearrangements. In addition, the intense accumulation of three retroelements in all species of Harttia and Hypostomus, especially in euchromatic regions, can indicate the participation of these elements in the diversification and evolution of these species through the molecular domestication by genomes of hosts, with these sequences being a co-option for new functions.(AU)

Os elementos transponíveis (TE) têm sido amplamente aplicados como marcadores cromossômicos. Contudo, em Loricariidae, há poucas análises de mapeamento físico destes elementos. Considerando a importância de elementos transponíveis para a evolução cromossômica e organização genômica, este trabalho realizou o mapeamento físico cromossômico dos retroelementos (RTEs) Rex1, Rex3 e Rex6 em sete espécies do gênero Harttia e em quatro espécies do gênero Hypostomus, com o intuito de melhor compreender a organização e dinâmica dos genomas das espécies de Loricariidae. Os resultados evidenciaram um intenso acúmulo dos RTEs Rex1, Rex3 e Rex6 e distribuição dispersa em regiões heterocromáticas e eucromáticas no genoma das espécies estudadas. A presença de retroelementos em algumas regiões cromossômicas sugere sua participação em vários rearranjos cromossômicos. Além disso, o intenso acúmulo dos três retroelementos em todas as espécies de Harttia e Hypostomus, especialmente em regiões eucromáticas, pode indicar a participação destes elementos na diversificação e evolução destas espécies através da domesticação molecular pelo genoma dos hospedeiros, com estas sequências sendo co-optadas paras novas funções.(AU)

Assessment of the nitrification process in a culture of pacific white shrimp, using artificial substrate and bacterial inoculum in a biofloc technology system (BFT) / Avaliação do processo de nitrificação no cultivo do camarão branco do pacífico Litopenaeus vannamei com uso de substrato artificial e inóculo de bactérias em sistema de bioflocos (BFT)

ABSTRACT: Litopenaeus vannamei is the most cultured marine shrimp in all types of systems including the Bioflocs Technology System (BFT). Bioflocs are formed by microorganisms, among these, autotrophic bacteria are responsible for the nitrification process. This study aimed to identify and promote the development of nitrifying bacteria by adding artificial substrates and biofloc inoculum in L. vannamei culture in a BFT system. The experiment consisted of four treatments with three replics (4x3) as follows: (1) Control: clear water in which bioflocs were formed; (2) IN (10%): clear water with biofloc inoculum (10%); (3) IB: clear water with substrate (immature "bioballs"); and (4) MB: clear water with mature "bioballs" inoculum from a recirculation system. Treatments were stocked with shrimp juveniles (4.92±0.45 g) in 12 tanks with 200 L working volume at a stocking density of 200 shrimp/m³. Shrimps were fed twice a day with a commercial feed (38% CP) following a feeding table, and daily observations intake were made over the four weeks of the experiment. Biofloc and "bioballs" samples were collected to detect the growth of the population of nitrifying and heterotrophic bacteria by FISH. There was no significant difference between treatments (P>0.05) for survival, obtaining mean values greater than 88%. The IN (10%) treatment had lower concentrations of ammonia and nitrite, and nitrate concentration increased, while MB had a higher weight and biomass final, productivity, weekly weight gain and lower conversion of apparent feed for production performance results.

RESUMO: Litopenaeus vannamei é o camarão marinho mais cultivado em todos os tipos de sistemas, incluindo o Sistema de Tecnologia de Bioflocos (BFT). Os bioflocos são formados por microorganismos, entre estes, bactérias autotróficas que são responsáveis pelo processo de nitrificação. Este estudo teve como objetivo identificar e promover o desenvolvimento de bactérias nitrificantes pela adição de substratos artificiais e inóculo de bioflocos no cultivo de L. vannamei em sistema BFT. O experimento consistiu de quatro tratamentos com três repetições (4x3), sendo: (1) Controle: água limpa, na qual foram formados os bioflocos; (2) IN (10%): água limpa com inóculo de bioflocos (10%); (3) BI: água limpa com substrato ("bioballs" imaturos); e (4) BM: água limpa com inóculo de "bioballs" maduros de um sistema de recirculação. Para tanto, os tratamentos foram estocados com juvenis de camarão (4,92±0,45 g) em 12 tanques com 200 L de volume útil com densidade de 200 camarões/m³. Os camarões foram alimentados duas vezes ao dia com ração comercial (38% PB) seguindo uma tabela de alimentação, e observações diárias foram feitas ao longo das quatro semanas de experimento. Amostras de bioflocos e "bioballs" foram coletadas para detectar o crescimento da população de bactérias nitrificantes e heterotróficas por FISH. Não houve diferença significativa entre os tratamentos (P>0,05) para sobrevivência, obtendo-se valores médios superiores a 88%. O tratamento com IN (10%) apresentou menores concentrações de amônia e nitrito, e a concentração de nitrato aumentou, enquanto o BM apresentou maior peso e biomassa final, produtividade, ganho de peso semanal e menor conversão alimentar aparente para resultados de desempenho zootécnico.

Infecções endodônticas primária x secundária: perfil microbiano, níveis de endotoxinas e ácido lipoteicóico, sinais e sintomas / Primary x secondary endodontic infections: microbial profile, endotoxins and lipoteichoic acid levels, signs and symptoms

Esta pesquisa clínica teve como objetivo comparar a carga e composição microbiana bem como as concentrações de LPS e LTA encontradas na infecção endodôntica primária (IEP) e na infecção endodôntica secundária (IES). Além disso, a correlação desses achados com características clínicas e tomográficas também foram investigadas. Sessenta dentes de pacientes com IEP (31) e IES (29) foram submetidos à avaliação clínica e tomográfica, seguido do tratamento endodôntico ou retratamento. Amostras foram coletadas de cada canal radicular utilizando cones de papel. Logo após a abertura coronária (IEP) ou após a desobturação dos canais (IES) o conteúdo coletado foi submetido à técnica de cultura microbiológica para determinar a carga microbiana de bactérias anaeróbias e ao método Checkerboard DNA-DNA hybridization para investigação de espécies bacterianas presentes. O teste de Lisado de Amebócito de Limulus e o Ensaio de Imunoabsorção Enzimática foram utilizados para quantificar os níveis de LPS e LTA. Os dados obtidos foram correlacionados com os achados clínicos e tomográficos. Maiores quantidades de bactérias cultiváveis e de LPS foram encontradas na IEP (p < 0,05). Não houve diferença nos níveis de LTA entre IEP e IES (p > 0,05). A mediana de espécies por canal radicular encontrada na IEP foi de 9 espécies e na IES foi de 22 (p < 0,05). As espécies bacterianas mais prevalentes detectadas na IEP foram P. gingivalis (14/31) e S. intermedius (14/31). Na IES, as espécies mais prevalentes foram P. gingivalis (21/29) e C. rectus (20/29). LPS foi correlacionado positivamente com um maior volume da lesão periapical (p < 0,05). Níveis de LTA não foram relacionados a sinais e sintomas ou ao volume da lesão periapical (p > 0,05). Concluiu-se que dentes com IEP tiveram maiores quantidades de carga microbiana e de LPS do que os dentes com IES. Uma maior quantidade de LPS foi correlacionada positivamente com um maior volume de destruição óssea periapical. Uma ampla interação de espécies bacterianas específicas resultou em diferentes características clínicas(AU)

This clinical research aimed to compare the microbial load and composition as well as the LPS and LTA concentrations found in Primary Endodontic Infection (PEI) and Secondary Endodontic Infection (SEI). In addition, the correlation of these findings with clinical and tomographic features was also investigated. Sixty patients' teeth with PEI (31) and SEI (29) were submitted to clinical and tomographic assessment, followed by endodontic treatment or retreatment. Samples were taken from each root canal using paper points. After the coronary opening (PEI) or after the removal of root filling material (SEI), the collected samples were submitted to the microbiological culture technique to determine the microbial load of anaerobic bacteria and to the Checkerboard DNA-DNA hybridization method for investigation of present bacterial species. The Limulus amebocyte lysate assay and enzyme-linked immunosorbent assay were used to quantify LPS and LTA levels. The data obtained were correlated with clinical and tomographic findings. A higher number of cultivable bacteria and LPS was found in PEI (p < 0.05). There was no difference in LTA levels between PEI and SEI (p> 0.05).The median number of species per root canal found in PEI was 9 and 22 in SEI (p < 0.05). The most prevalent bacterial species detected in PEI were P. gingivalis (14/31) and S. intermedius (14/31). In SEI, the most prevalent species were P. gingivalis (21/29) and C. rectus (20/29). LPS was positively correlated with a larger periapical lesion volume (P < 0.05). LTA levels were not related to signs and symptoms or periapical lesion volume (p> 0.05). It was concluded teeth with PEI had higher contents of microbial load and LPS than teeth with SEI. However, a more diverse microbiota was found in SEI than that of PEI. Higher content of LPS was positively correlated with larger periapical bone destruction. A widely interaction of specific microbial species resulted in different clinical features(AU)

Preimplantation genetic diagnosis associated to Duchenne muscular dystrophy / Diagnóstico genético pré-implantacional associado à distrofia muscular de Duchenne

ABSTRACT Duchenne muscular dystrophy is the most common muscle disease found in male children. Currently, there is no effective therapy available for Duchenne muscular dystrophy patients. Therefore, it is essential to make a prenatal diagnosis and provide genetic counseling to reduce the birth of such boys. We report a case of preimplantation genetic diagnosis associated with Duchenne muscular dystrophy. The couple E.P.R., 38-year-old, symptomatic patient heterozygous for a 2 to 47 exon deletion mutation in DMD gene and G.T.S., 39-year-old, sought genetic counseling about preimplantation genetic diagnosis process. They have had a 6-year-old son who died due to Duchenne muscular dystrophy complications. The couple underwent four cycles of intracytoplasmic sperm injection (ICSI) and eight embryos biopsies were analyzed by polymerase chain reaction (PCR) for specific mutation analysis, followed by microarray-based comparative genomic hybridisation (array CGH) for aneuploidy analysis. Preimplantation genetic diagnosis revealed that two embryos had inherited the maternal DMD gene mutation, one embryo had a chromosomal alteration and five embryos were normal. One blastocyst was transferred and resulted in successful pregnancy. The other embryos remain vitrified. We concluded that embryo analysis using associated techniques of PCR and array CGH seems to be safe for embryo selection in cases of X-linked disorders, such as Duchenne muscular dystrophy.

RESUMO A distrofia muscular de Duchenne é a doença muscular mais comum observadas em crianças do sexo masculino. Atualmente, não há terapia eficaz disponível para distrofia muscular de Duchenne, portanto, é essencial o diagnóstico pré-natal e o aconselhamento genético para reduzir o nascimento desses meninos. Relatamos um caso de diagnóstico genético pré-implantação associado à distrofia muscular de Duchenne. O casal E.P.R., 38 anos, heterozigota, sintomática para uma mutação de deleção dos éxons 2 a 47 no gene DMD e G.T.S., 39 anos, buscaram aconselhamento genético sobre o processo de diagnóstico genético pré-implantação. O casal relatou que tiveram um filho de 6 anos que morreu devido a complicações da distrofia muscular de Duchenne. Os pacientes realizaram quatro ciclos de injeção intracitoplásmica de espermatozoides (ICSI) e oito biópsias de embriões foram analisadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) para análise de mutação específica, seguida hibridação genômica comparativa baseada em microarranjos ( array CGH) para a pesquisa de aneuploidias. O diagnóstico genético pré-implantação revelou que dois embriões haviam herdado a mutação materna no gene DMD , um embrião tinha uma alteração cromossômica e cinco embriões eram normais. Um blastocisto foi transferido e resultou em gravidez bem sucedida. Os outros embriões permanecem vitrificados. Concluímos que a análise de embriões utilizando técnicas associadas de PCR e CGH array mostrou-se segura para a seleção de embriões em casos de doenças ligadas ao X, como a distrofia muscular de Duchenne.

Hibridização in situ fluorescente para diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli ­em suínos / Fluorescence in situ hybridization for diagnosis of Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli in swine

Disenteria Suína e Colite Espiroquetal são duas enfermidades importantes em suínos causados pela Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira pilosicoli, respectivamente. O diagnóstico eficaz dessas espécies é extremamente importante para a adoção de estratégias adequadas para o controle. Propõe-se avaliar a técnica de hibridização in situ de fluorescência (FISH) para detecção de B. hyodysenteriae e B. pilosicoli em fragmentos histopatológicos de intestino de suínos e compará-la ao PCR duplex. Foram analisadas amostras de fezes e intestinos de suínos de terminação com histórico de diarreia pelas técnicas de reação em cadeia da polimerase duplex (dPCR), hibridização in situ fluorescente (FISH) para diagnóstico dessas bactérias. Foram utilizadas 34 amostras de intestino de suínos de campo positivos para alguma das duas espécies de Brachyspira sp. nos testes de FISH ou PCR. Das 34 amostras analisadas, foram detectadas 28 (82,35%) positivas na PCR e no FISH. Dentre as 29 amostras positivas para B. hyodysenteriae, 23 (79,3%) foram positivas à PCR e 21 (72,4%) no FISH. Os resultados de FISH e PCR não diferiram estatisticamente entre si. Baseado no fato dessa técnica poder ser realizada em tecidos formolizados, ser prática, rápida e associar a marcação especifica do agente com lesões histológicas, o FISH demonstrou ser mais uma alternativa no diagnóstico de Brachyspira hyodysenteriae e B. pilosicoli.(AU)

Growing and finishing pigs are affected by pathogenic spirochetes of the genus Brachyspira sp., which cause a significant economic impact due to direct and indirect losses. Thus, efficient diagnosis of these species enables better technical intervention to prevent or treat diseases. This study aimed to evaluate the fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of B. hyodysenteriae and B. pilosicoli in histopathologic fragments of pig's intestine and compare it to the duplex PCR. Thirty-four samples collected from pigs positive for these species in at least one of the tests were used in the study. Out of the 34 analyzed intestine samples, 28 (82.35%) were positive by PCR and FISH. Among the 29 B. hyodysenteriae positive samples, 23 (79.3%) were positive by PCR and 21 (72.4%) by FISH. There was no statistical difference among the detection rate of the used tests. Based on the fact this technique can be performed in formalin fixed tissue samples, it is practical, fast and allows the association of labeling a specific agent with histological lesions, FISH has become an alternative diagnostic method for Brachyspira hyodysenteriae and B. pilosicoli.(AU)

Mycoplasma hyorhinis infection in early cases of mycoplasmal pneumonia in swine and evaluation of diagnostic assays / Infecção por Mycoplasma hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica em suínos e comparação entre técnicas diagnósticas

Mycoplasmal pneumonia is an important disease in the pig industry. Due to the controversial role of Mycoplasma hyorhinis in this disease, confirmation of the presence of this bacterium and the identification of its roles in respiratory disease remain major challenges. The objectives of this study were to evaluate the presence of M. hyorhinis in early cases of mycoplasmal pneumonia and to determine the usefulness of fluorescent in situ hybridization (FISH) for the diagnosis of respiratory mycoplasmosis in naturally infected pigs. Ninety M. hyopneumoniae and/or M. hyorhinis-infected lung tissue samples based on diagnostic mosaic (DM) were used. The average age of the animals was 116 and 57 days (P<0.01) for groups 1 (positive-M. hyopneumoniae only) and 2 (positive-M. hyorhinis only), respectively. These findings suggest that development of lesions caused by M. hyorhinis occurs earlier than for M. hyopneumoniae. Using the DM as the gold standard, the sensitivity and specificity of FISH for M. hyopneumoniae were 75 and 100%, respectively, and were 40 and 73.3% for the immunohistochemistry (IHC). The sensitivity and specificity of FISH for M. hyorhinis were 76.7 and 100%, respectively. These findings demonstrate that FISH can be a useful tool for diagnosing mycoplasmosis. Viral antigens (PCV2 or influenza A) were detected in 53.3% (16/30) of the samples in group 2 (M. hyorhinis-PCR positive) and 13.3% (4/30) of the samples in group 1 (M. hyopneumoniae-PCR positive). This finding indicates that the association of M. hyorhinis and viral infection in nursery pigs likely starts due to a viral immunosuppressive condition.(AU)

A pneumonia micoplásmica causada por bactérias do gênero Mycoplasma é uma enfermidade de grande importância para indústria suinícola, sendo ainda controverso o papel desempenhado por Mycoplasma hyorhinis nessa doença. A confirmação da presença dessas bactérias bem como a identificação de seus papéis em doenças respiratórias continua sendo um grande desafio. Os objetivos desse estudo foram comparar diferentes técnicas, em especial a de hibridização fluorescente in situ (FISH), para diagnóstico de micoplasmoses respiratória em suínos naturalmente infectados e avaliar a presença do M. hyorhinis em casos precoces de pneumonia micoplásmica. Foram utilizadas 90 amostras de tecido pulmonar infectado para cada um ou ambos os agentes (M. hyopneumoniae e M. hyorhinis) determinados pelo mosaico de diagnóstico (sinais clínicos, lesões macroscópicas e microscópicas e pela PCR). No grupo de animais positivos pela PCR apenas para M. hyorhinis (Grupo 2) a média da idade foi de 57,32 dias e no grupo apenas positivo para M. hyopneumoniae (Grupo 1) a média foi de 116,31 dias (P<0,01). Estes achados sugerem que a colonização e o aparecimento de lesões causadas pelo M. hyorhinis seja mais precoce do que aquelas causadas pelo M. hyopneumoniae. As alterações microscópicas foram estatisticamente (P<0,01) mais intensas no grupo 1 do que no grupo 2. Usando o mosaico de diagnóstico como padrão ouro, a sensibilidade e especificidade na FISH para M. hyopneumoniae foi de 75 e 100%, respectivamente, e 40 e 73,3%, na imuno-histoquímica. A sensibilidade e especificidade da FISH para M. hyorhinis foi de 76,7 e 100%. Esses valores demonstram que a FISH pode ser uma ferramenta útil para diagnóstico de micoplasmoses. Foi detectada a presença de agentes virais (PCV2 ou influenza) em 53,3% das amostras do grupo 2 (M. hyorhinis) e em 13,3% das amostras do grupo 1 (M. hyopneumoniae).(AU)

Genomic imbalances in syndromic congenital heart disease / Desequilíbrios genômicos na cardiopatia congênita sindrômica

Abstract Objective: To identify pathogenic genomic imbalances in patients presenting congenital heart disease (CHD) with extra cardiac anomalies and exclusion of 22q11.2 deletion syndrome (22q11.2 DS). Methods: 78 patients negative for the 22q11.2 deletion, previously screened by fluorescence in situ hybridization (FISH) and/or multiplex ligation probe amplification (MLPA) were tested by chromosomal microarray analysis (CMA). Results: Clinically significant copy number variations (CNVs ≥300 kb) were identified in 10% (8/78) of cases. In addition, potentially relevant CNVs were detected in two cases (993 kb duplication in 15q21.1 and 706 kb duplication in 2p22.3). Genes inside the CNV regions found in this study, such as IRX4, BMPR1A, SORBS2, ID2, ROCK2, E2F6, GATA4, SOX7, SEMAD6D, FBN1, and LTPB1 are known to participate in cardiac development and could be candidate genes for CHD. Conclusion: These data showed that patients presenting CHD with extra cardiac anomalies and exclusion of 22q11.2 DS should be investigated by CMA. The present study emphasizes the possible role of CNVs in CHD.

Resumo Objetivo: Identificar desequilíbrios genômicos patogênicos em pacientes que apresentam cardiopatias congênitas (CC) e anomalias extracardíacas e exclusão da síndrome de deleção 22q11.2 (SD22q11.2). Métodos: Foram avaliados por microarray cromossômico (CMA) 78 pacientes negativos para a deleção 22q11.2, previamente testados por hibridação in situ com fluorescência (FISH) e/ou amplificação de múltiplas sondas dependentes de ligação (MLPA). Resultados: Foram identificadas variações do número de cópias de DNA (CNVs) clinicamente significativas (≥ 300 kb) em 10% (8/78) dos casos, além de CNVs potencialmente relevantes em dois casos (duplicação de 993 kb em 15q21.1 e duplicação de 706 kb em 2p22.3). Genes envolvidos como IRX4, BMPR1A, SORBS2, ID2, ROCK2, E2F6, GATA4, SOX7, SEMAD6D, FBN1 e LTPB1 são conhecidos por atuar no desenvolvimento cardíaco e podem ser genes candidatos a CC. Conclusão: Esses dados mostram que pacientes que apresentam CC, com anomalias extracardíacas e exclusão da SD22q11.2, devem ser investigados por CMA. Ainda, este estudo enfatiza a possível função das CNVs nas CC.

A importância da hibridização de sistemas de instrumentação no tratamento endodôntico: relato de caso / The importance of instrumentation systems hibridization in endodontic treatment: case report

Introdução: a associação do preparo biomecânico adequado à desinfecção do canal radicular e à obturação satisfatória é importante para que o tratamento endodôntico tenha um prognóstico favorável. A complexidade anatômica dos canais radiculares é um fator limitante na instrumentação e impõe ao operador a necessidade de realizar diferentes manobras para conseguir alcançá-la. Objetivo: relatar um caso de tratamento endodôntico no dente #47, com anatomia complexa e dupla curvatura radicular, em paciente com limitada abertura de boca. Relato de caso: o preparo mecânico foi realizado utilizando-se técnica de instrumentação híbrida, com limas manuais de diferentes tipos (Kerr, Hedströen e Flexofile), brocas Gates-Glidden e limas rotatórias (sistema ProDesign S), que foram associadas na tentativa de aumentar a efetividade da limpeza dos três canais. Entre as sessões, foi utilizada medicação intracanal de hidróxido de cálcio e os canais foram obturados pela técnica de condensação lateral. Conclusão: após o estudo da literatura pertinente e a realização do caso clínico, concluiu-se que por meio da hibridização de sistemas é possível obter um tratamento endodôntico com melhor prognóstico e maior segurança. Ao utilizar o melhor de cada técnica, reforça-se a teoria de que nenhuma delas é totalmente completa e que instrumentos manuais, mesmo com o grande avanço dos aparelhos automatizados, ainda possuem seu valor e continuam sendo essenciais nos protocolos de instrumentação.

Assessment of HER-2 status in invasive breast cancer in Brazil / Avaliação de HER-2 no câncer de mama invasivo no Brasil

Summary Objective: To characterize the frequency of HER-2-positive breast cancer in Brazil. Method: In this prospective observational study, we first ascertained the HER-2 status of invasive breast cancer specimens by automated immunohistochemistry (IHC). For specimens classified as 2+ by IHC, we performed in situ hybridization (ISH). Results: From February, 2011 to December, 2012, 1,495 breast specimens were registered, and 1,310 samples collected at 24 centers were analyzed. Median patient age was 54 years, and the majority of samples were obtained from segmental (46.9%) or radical mastectomy (34.4%). The predominant histological type was invasive breast carcinoma of no special type (85%), 64.3% had tubule formation (grade 3), and estrogen/progesterone receptors (ER/PR) were positive in 77.4/67.8% of the specimens analyzed, respectively. Using IHC, we found a negative HER-2 status (0 or 1+) in 72.2% of specimens, and 3+ in 18.5%; the 9.3% scored as 2+ were further analyzed by ISH, of which 15.7% were positive (thus, 20.0% of samples were HER-2- -positive by either method). We found no association between HER-2 scores and menopausal status or histological type. Tumors classified as 3+ came from younger patients, and had higher histological grade and less frequent expression of ER/PR. In the North region of Brazil, 34.7% of samples were 3+, with lower frequencies in the other four regions of the country. Conclusion: Our findings provide estimates for the frequency of HER-2 positivity in Brazil and raise the hypothesis that biological differences may underlie the different distribution of breast-cancer phenotypes among different Brazilian regions.

Resumo Objetivo: Estimar a frequência de câncer de mama positivo para HER-2 no Brasil. Método: Neste estudo observacional e prospectivo, verificamos o escore de HER-2 de espécimes de câncer de mama invasivo por imuno-histoquímica automatizada (IHQ). Para amostras classificadas como 2+ por IHQ, fizemos hibridização in situ (HIS). Resultados: De fevereiro de 2011 a dezembro de 2012, 1.495 espécimes de mama foram registrados, e 1.310 amostras coletadas por 24 centros foram analisadas. A idade mediana das pacientes foi 54 anos, e a maioria das amostras foram obtidas a partir de mastectomia segmentar (46,9%) ou radical (34,4%). O tipo histológico predominante foi o carcinoma invasivo da mama, sem tipo especial (85%); 64,3% tinham formação de túbulos (grau 3); e os receptores de estrógeno (RE)/progesterona (RP) foram positivos em 77,4%/67,8% das amostras analisadas. Por IHQ, encontramos HER-2 negativo (0 ou 1+) em 72,2% das amostras, e 3+ em 18,5%; os 9,3% de casos classificados como 2+ foram analisados por HIS, e 15,7% deles foram positivos (assim, 20,0% das amostras foram positivas para HER-2 por qualquer método). Não encontramos associação entre escores de HER-2 e estado menopausal ou tipo histológico. Tumores classificados como 3+ vieram de pacientes mais jovens, tinham maior grau histológico e foi menos frequente a expressão de RE/RP. Na região Norte do Brasil, 34,7% das amostras foram 3+, com frequências mais baixas nas outras quatro regiões do país. Conclusão: Nossos resultados permitem estimar a frequência de positividade do HER-2 no Brasil, gerando a hipótese de que pode haver diferenças biológicas subjacentes à distribuição dos fenótipos de câncer de mama entre as diferentes regiões brasileiras.